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产品简介

亲脂性荧光染料PKH67(Green)和PKH26(Red) 适用于常规细胞膜标记。荧光染料PKH67 是?种可对体外和体内细胞示踪的绿色荧光染料，通过与膜结构的脂质分?结合?标记细胞。PKH67对细胞毒性较?，荧光背景低，脂溶性?，能够轻易穿透细胞膜，有着强?稳定的绿?荧光。经PKH67标记的细胞可?于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染?的功能。在细胞分裂增殖过程中，PKH67 的荧光强度会随着细胞的分裂?逐级递减，标记荧光可平均分配?两个?代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的?半，根据这?特性，它可被?于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等??。PKH67标记细胞的荧光?常均?，并且分裂后的?代细胞的荧光分配也更均?。在细胞分裂增殖过程中，PKH67标记荧光可平均分配?两个?代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的?半，通过流式细胞仪根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂?次(1/2 的荧光强度)，?次(1/4 的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。PKH67 可检测分裂次数多达六次甚?更多。除了?于细胞增殖检测，PKH67 还可以?于细胞的体外盒体内?踪，标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注?体内，可以有效的显?移植细胞在活体组织中的迁移及分化。PKH67标记的细胞?于体内观察可以长达数周之久，它常被?来做活体细胞检测实验和?荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较?，不影响细胞的增殖能?。此?法操作简单，且不?放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

由于炭尾长度更长，内部研究已经证明PKH67比PKH2由更少的细胞间转移。在采用PKH1和PKH2进行的体内研究中，荧光强度都会缓慢损失。由于这是绿色细胞linker染料而非红色细胞linker染料出现的行为特征，因而PKH67会出现类似的性质。不分裂细胞的体外细胞膜留存和体内荧光半衰期的关联性揭示，PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。其他具有类似半衰期的绿色细胞linker染料已经被用于监测1-2月内的体内 淋巴细胞和巨噬细胞运输，结果表明PKH67还可用于中等时长的体内跟踪研究。

染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞示踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。PKH67标记细胞后通常?流式细胞仪进?细胞增殖检测。

试剂盒组分

PKH67标记细胞呈绿?荧光，荧光波长：λex=490 nm,  λem=502 nm。

实验步骤

1．染色液制备：

（1）从冰箱中取出PKH67试剂，静置?分钟?室温，或者37℃?浴?刻后，离?盛放PKH67 的管?，开盖前请务必离??分钟让试剂充分落?管底后才能开盖。

（2）根据需要检测的细胞样品数，?稀释液将探针10倍稀释，再?合适的溶液(如：??清培养基，HBSS或PBS)将PKH67母液25倍稀释，配制成染??作液。最佳?作液浓度请根据不同细胞和??的实验体系来调整。?般细胞使?按试剂盒中的母液的终浓度250倍稀释即可，有些细胞可能需要适当增加浓度。

2. 细胞染色

（1）将制备好的待测细胞?100μl染??作液重悬，?细胞浓度?约107/ml。也可以进?原位染?，染?液?够覆盖细胞即可。

（2）在2～8 ℃培养细胞 15～30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

建议待标记细胞在染??作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。

低温孵育可降低细胞对染料的内吞作?，有助于染料对质膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性。

（3）离?后去上清，收集细胞，?PBS或??清培养基洗涤细胞1-2次，最后加?PBS或??清培养基重悬细胞。

（4）取500μl 细胞悬液，?流式细胞仪检测。Ex/Em=490/502nm。

（5）随后还可按照细胞的正常培养?法进?培养。

（6）可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再?流式细胞仪检测细胞增殖，或?于其他特定实验?的的细胞荧光?踪。

储存条件：-20℃避光保存有效期1年

注意事项：

1.染?浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少?异。

2.配制的PKH67母液极易?解，建议分装保存， ≦-20℃冷冻干燥保存。

3.PKH67 ?作液应现配现?，不能提前配制，因为PKH67 吸?会分解，影响染?效果。

4.PKH67 易被?解，在?溶液中会很快变质。母液请在使?过程中避免接触?。?作液在标记细胞的过程5.中和?接触是在许可的时间范围内的。

6.PKH67荧光染?剂为乙醇溶液，在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固?粘在离?管管底、管壁或管盖内，7.从冰箱取出后恢复?室温，变成液体状态后离??管底部再开盖。可以37℃?浴?刻?全部融解后使?。

8.不同的细胞种类标记后可以?踪的代次或时间差异较?，请根据实际情况或参考?献进?检测。

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