I.简介
SUPERSWITCH™ RACE cDNA合成试剂盒通过扩增基因的5'和3'末端精细、有效地完整克隆基因。SUPERSWITCH™ RACE方法可有效地在样品cDNA 5 '和3 '末端加入人工接头,尽可能地形成最完整的RACE产物。反转录步骤后合成的第一链cDNA可直接用于5'和3' RACE PCR反应,无需再进行繁复的第二链cDNA合成和接头连接的过程。其他RACE方法均因扩增的高背景和截短的5 '末端而存在明显的劣势。优化后的方法既便是在样本很小的情况下,也可以显著降低非特异性的扩增,且只需单一PCR管和两步法的程序就可使您的RNA样品合成cDNA。
此外,SUPERSWITCH™技术由于避免了接头连接的步骤,在RACE PCR过程中直接使用cDNA作为模板,从而降低了RACE的过程的复杂性,并使其更快捷(Chenchik et al,1998),操作时间更缩短至4个小时。
SUPERSWITCH™ PCR RACE Kit也对PCR过程也进行了优化,增加RACE反应的灵敏性的同时,降低了试验背景。因此,试验者可用很少的mRNA或是总RNA作为反转录的模板来构建全长cDNA。
II. SUPERSWITCH™ cDNA 合成技术
通常cDNA的合成方法均通过逆转录酶(反转录)将mRNA反转录成第一链的单链cDNA(single-stranded cDNA,ss cDNA)。受限于反转录的效率,基因的5'端在反转录过程中常常不能被转录,最终形成的cDNA的5'端通常并不完整。在基因序列较长、mRNA连续出现二级结构,特别是仅以oligo(dT)引物合成第一链cDNA的情况下,5'端cDNA链合成截短的现象尤为突出。以未降解的RNA构建的cDNA文库中,出现的截短的cDNA的分子常因反转录过程异常终止所致。但无论如何,SUPERSWITCH™方法能够优先富集的全长cDNA片段。
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