产品展厅
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产品简介
随着ONT的技术发展。每个分子实验室都可以轻易获取一台nanopore的MiniON.nanopor推动了第三代测测的DIY时代。每个分子实验室都可以根据自己的需要进行个性化的三代测序。为了满足这种个性化需求。Tiosbio推出了SUPERSWITCH®
三代转录组建库试剂盒。SUPERSWITCH™第三代测序转录组文库构建试剂盒提供了一种基于PCR方式从纳克级总RNA合成高质量cDNA的方法。SUPERSWITCH™第三代测序转录组文库构建试剂盒cDNA合成技术是基于RNA转录5’末端跳转机制 (Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template，SMART) 技术。SMART技术非常适合起始样品量有限的材料，能够以2 ng总RNA（或极低浓度样本）合成的高质量cDNA，用于杂交探针、”Virtual Northern” blots、cDNA测序及其他应用。
本试剂盒的5’和3’采用不同的接头引物，在原始数据上就能直接判读resds的来源是mRNA还是cDNA。
本试剂盒采用SUPERSWITCH®
技术，生成高质量的双链cDNA。满足nanopore的上机要求。
本试剂盒的建库产物，280/260值大于1.9.230/260值大于1.8，nanodrop/Qbuti比值小于2.满足nanopore转录组苛刻的上机要求质量。是数据稳定产出的基本保障。
本试剂盒的模板为样本的总RNA,最大限度的反应了样本的转录组的均一性。
本试剂盒最终的产物，都为15个循环的扩增产物。为今后的nanopore的reads定量打下了坚实的基
试剂盒组分：
试剂盒1
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目的 |
试剂 |
PacBio |
Nanopore |
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SP0021 |
SN0021 |
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M/10次 |
L/20次 |
M/10次 |
L/20次 |
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反
转 录 |
1 |
●SUPERSWITCH™ 3RRT Oligonucleotide |
12μL |
24 μL |
6μL |
12μL |
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|
2 |
●dNTP Mix (10 mM) |
40 μL |
80 μL |
20 μL |
40 μL |
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|
3 |
●Deionized H2O |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
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|
4 |
●5X First-Strand Buffer (RNase-Free) |
60 μL |
120 μL |
30 μL |
60 μL |
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|
5 |
●SUPERSWITCH™ SolutionⅠ |
10 μL |
20 μL |
5 μL |
10 μL |
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|
6 |
●SUPERSWITCH™ SolutionⅡ |
10 μL |
20 μL |
5 μL |
10 μL |
||
|
7 |
●RNase Inhibitor (40 U/μL) |
12 μL |
25 μL |
6 μL |
12 μL |
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8 |
●SUPERSWITCH™ Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
12 μL |
25 μL |
6 μL |
12 μL |
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9 |
●SUPERSWITCH™ 5RRT Oligonucleotide |
12 μL |
24 μL |
6 μL |
12 μL |
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PCR |
10 |
●5AP PCR Primer (12 μM) |
100 μL |
200 μL |
100 μL |
200 μL |
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|
11 |
●3AP PCR Primer (12 μM) |
100 μL |
200 μL |
100 μL |
200 μL |
||
|
12 |
●Marathon DNA Polymerase（1U/μL） |
24μL |
48μL |
24 μL |
48 μL |
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|
13 |
●2×PCR Buffer |
765μL |
1530 μL |
765μL |
1530 μL |
||
|
14 |
●2.5 mM dNTP |
160μL |
320 μL |
200 μL |
400 μL |
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1. 试剂盒2：Tiosbio™ 200bp Cleaner
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目的 |
试剂 |
PacBio |
Nanopore |
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M/30次 |
L/60次 |
M/30次 |
L/60次 |
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PCR
产物 纯化 |
1 |
○Buffer P5 |
7.5 mL |
15 mL |
15 mL |
30 mL |
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2 |
○Wash Buffer |
3.25 mL |
6.5 mL |
6.5 mL |
13 mL |
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