产品信息

本产品采用层析式双抗体夹心法同时检测目的基因CRISPR酶切产物和LAMP、RAA或RPA，PCR扩增产物。当CRISPR信号探针（A）扩增产物（B）和做如下修饰时，即可使用本产品进行检测——CRISPR信号探针（A）的一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM）；扩增产物（B）一端修饰有地高辛（Dig），另一端修饰有罗丹明（TAMRA）。

预期用途:

CRISPR单酶切产物和扩增产物的同时检测。

包装规格/货号:

图1. 单靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型）结构示意图

储存条件及有效期:

储存条件：存放于避光干燥处，储存温度4~30℃。

有效期：12个月。

操作步骤:

1. 根据检测样品数量取出相应数量的试纸条，并在吸收垫（图1）上做好标记。每根试纸条只能用于单次、2种不同产物的检测。 CRISPR单酶切产物体积为50~100μL时，可直接在200μL PCR反应管中检测核酸产物，产物体积不足50μL时，需在PCR管内加超纯水补足体积至50 μL，吸打混匀后，才能用于检测

2. LAMP，RAA/RPA，PCR扩增产物的CRISPR酶切反应结束后，打开PCR反应管，将 试纸条结合垫端（箭头端）插入PCR反应管（图1），液面不得超过结合垫最上端，待判读区全部浸润（约需1～2min，外界环境温度较低时，如冬季，会降低吸水速度，判读区浸润时间将会延长），待检测线（T线）显色后，可以将试纸条拿出。根据试纸条显色情况直接读取检测结果。

3. 质控线（C线）显色后10min内观察结果，10min后判读无效。

4. 记录检测结果，将试纸条密封丢弃在安全处。

图2. CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条结果判读示意

1. 阳性（+）：

试纸条质控线（C线）和2条检测线（T线）均出现条带，其中T1为红色，T2为蓝色，C线为红色；试纸条质控线（C线）不显色，T1为红色，T2为蓝色时，说明CRISPR体系可进行有效酶切， 并激活报告基团显色，相应的靶基因均可判定为阳性。

试纸条质控线（C线）和其中1条检测线（T线）出现条带，其中T1为红色，C线为红色，或仅有T1为红色时，说明明CRISPR体系可进行有效酶切，并激活报告基团显色，相应靶基因可判定为阳性；T2为蓝色，C线为红色时，说明带有Dig和罗丹明标记的目的基因扩增产物可判定为阳性。

2. 阴性（-）：

试纸条质控线（C线）为红色条带，检测线（T线）不显色，判定为阴性结果。

3.无效：

试纸条质控线（C线）和检测线（T线）均未出现条带，提示所用的试纸条或扩增试剂可能已经损坏、失效或操作有误。此时，应仔细阅读说明书，重新扩增和检测。如果问题仍然存在，应立即停止使用同一批号的产品，并与当地供应商联系。

注意事项及安全提示:

1. 本产品应结合探针使用，如探针合成纯度不足，探针含游离的Biotin或者游离的FITC时，会导致以超纯水为阴性对照的切割产物T线呈现红色，即阴性对照呈现假阳性结果。

2. 本产品可用于探针合成质量的检测。调整空白阴性对照中探针的使用浓度至400 nM，并进行切割反应。当试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的5~7 min内，试纸条T线显红色，即说明探针纯度难以满足实验要求，会因探针纯度不足导致假阳性结果。建议更换探针合成供应商，并重新合成探针。本产品在探针使用浓度为20~50nM的情况下，试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的30 min内，T线均不会显色。

3. 本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书，严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。

4. 产品应依照说明书要求，储存于合适的环境和温度下，并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。打开包装后请尽快使用试纸条，以免因试纸条受潮影响试验结果。检测环境光线不足，操作者色弱等因素均可能导致错误结果。

5. 使用完毕后，应尽快将纸条装进密封袋，妥善处理。本产品为一次性使用产品，仅限科研，请勿重复使用。

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