产品简介：

MTT 比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。 MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色 Formazan 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定 570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

warbio MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒采用了特有的 Formazan solvent，使检测本底低，灵敏度高，线性范围宽.。

试剂盒组分 

组分 A: MTT Solution(5mg/ml)  5 mL      -20℃，避光

组分 B: Formazan Solvent       60 mL     RT

保存条件：

    -20℃，避光 条件下保存，保质期 12 个月。

操作步骤(仅供参考)：

1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。

2、 低速离心，收集细胞沉淀。

3、 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。

4、 细胞接种于 96 孔培养板，一般接种密度为 3000～10000 个细胞/孔。通常细胞增殖实验每孔加 3000 个细胞，细胞毒性实验每孔加入 6000 个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。

5、 37℃ 5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养 6～24h。

6、 按照实验具体要求，给予 0～20μl 干预药物处理，37℃ 5%CO2继续培养至合适时间。

7、 弃培养液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育 4h。

8、 弃培养液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置摇床上低速振荡 10 min，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。

9、 在酶联免疫检测仪 570nm 测定各孔吸光度。

      注意事项

MTT solution 尽量减少反复冻融的次数，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。

 MTT solution 在低温情况下会凝固，置于室温或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

Formazan solvent 可以-20℃储存，当产生沉淀或凝固时可以 37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

观察 formazan 是否完全溶解，亦可以借助光学显微镜观察。

培养细胞时尽量细菌避免污染。

应注意设立 OD 调零孔和对照。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。。

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