产品信息

产品描述

鬼笔环肽是一种从鬼笔鹅膏中得到的有毒的环状七肽，可以与纤维肌动蛋白丝非常特异的结合，并且具有很高的亲和力。它能使肌动蛋白聚合物的临界浓度降低到小于1μg/mL，因此，常作为一种聚合促进剂使用。该物质可以被绿色荧光染料标记，从而作为标记物用于组织细胞培养、组织切片或无细胞系中的肌动蛋白标记。被Acti-stainTM 488 phalloidin标记的肌动蛋白丝其生物学特性未发生改变，包括与肌球蛋白结合的能力。

iFluorTM 488呈橙色，固体，分子量1406。该化合物吸光度和荧光扫描显示分别在500nm和550nm有一吸收峰和荧光峰。

注意事项：

鬼笔环肽  的分子量小，很容易通过细胞，不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。毒性较大，戴上手套操作。

鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品为iFluorTM 488标记的鬼笔环肽，可发出高亮度、光稳定的绿色荧光，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM 488 鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他iFluorTM偶联物（包含iFluorTM偶联二抗）。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。

本品以1000×储存液形式（溶于DMSO）提供。

操作步骤

1. 1×工作液准备

吸取1μl 1000×iFluorTM 488标记鬼笔环肽（溶于DMSO）到1ml 含有1%BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注：1）使用前需将1000×DMSO iFluorTM 488鬼笔环肽储存液分装并于-20℃避光干燥保存。

2）不同的细胞染色情况不同，相应iFluorTM 488鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

2. 染色步骤

1）   细胞培养过夜或更长，使其密度达到50-60%汇合度。

2）   吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3）   使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4）   室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

5）   （可选）：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5min，从而增加其通透性。

6）   室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

7）   取足够量新鲜配好的 iFluorTM 488标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞，如：100μl/孔（96孔板），室温避光染色20-90min。

8）   用PBS清洗细胞3次，每次5min。

9）   （可选）：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100μl/孔（96孔板），室温3~5min。用PBS清洗细胞2次，每次5min。

10）于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择iFluorTM 488激发/发射滤片（Ex/Em=493/517nm）和/或DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。

1）DMSO有毒，使用时请小心操作。

2）了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Note:   鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人，其半数致死剂量为2mg/Kg）。