DiI, DiO, DiD和DiR作为类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于恰当浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

四种细胞膜染料的区别：

DiD染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，染料在整个细胞膜上扩散， 浓度时可以使整个细胞膜染色。

绿色荧光、亲脂性羰花青DiOC18(3)被广泛用作亲脂示踪剂。它在水里是弱荧光的，但当嵌入膜时，它的荧光和光稳定性都很好。

DiI是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂，通常不会影响细胞的生存力。

DIR是一个亲脂性、近红外荧光花青染料。这个染料常用于标记细胞质膜。两个18-碳链插入到细胞膜，从而特定的、稳定的细胞染色，几乎不会发生细胞间的染料转移。可以用乙醇配置其储存液。细胞染色通常使用的浓度时1-10uM，孵育10-20分钟的。

它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

四种细胞膜染料的优点：

1. 应用广泛：主要作用是标记细胞膜，用于活的或固定的神经元等细胞或组织的长期示踪剂，同时还可以标记其他疏水结构，例如外泌体

2. 不会影响细胞的生存力

3. 体外培养的条件下可以存活很长时间

4. 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6mm/day

Di家族荧光染料选择小窍门：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR（D12731）波长更长，更适合组织染色，DiA为亲脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），常用于神经元的示踪，可与DiI联合使用进行神经细胞的双色标记。研究发现，某些情况下当DiO不能标记固定组织时，DiA可得到良好标记效果。DiA与磷脂双层膜结合后，光谱迁移明显加强。正由其发射光谱非常广，在适当的滤光片下，可以绿色、橙色，甚至红色荧光被检测到。沃博生物提供物美价廉的 产品。

关于染料的使用注意事项

1.DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度约为 1-2.5mg/ml，发现较难溶解时可以适当用超声处理以促进溶解。

2.用于细胞膜荧光标记时，DiI 的常用浓度为 1-25μM，最常用的浓度为 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为 5-20 分钟。

4. 染固定的细胞时，通常使用 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

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