与常规的非变性细胞裂解缓冲液（RIPA buffer, 1% Triton X-100 等）相比，这款缓冲液套装（Buffer Kit）能迅速且高效地提取增溶相对困难的脂筏（Lipid Raft）蛋白质。从常规缓冲液中不可溶而丢弃的膜组分中，在维持蛋白质功能的情况下能实现高效地提取，有利于对脂筏等蛋白质的功能分析。

细胞膜上的不溶性成分—脂筏（Lipid Raft）

在蛋白质功能分析的细胞裂解步骤中，常选用RIPA缓冲液与1% Triton X-100缓冲液这类相对温和的细胞膜裂解缓冲液。它们对蛋白质的结构和功能影响较小，因此适用于酶活性测定、免疫沉淀及各类结合实验等蛋白质功能分析场景。与之相比，SDS缓冲液虽具有强蛋白质变性作用，但上述温和缓冲液的增溶能力较弱，无法溶解以脂筏（Lipid Raft）为主要成分的细胞膜组分。由于多数表面活性剂均难以溶解脂筏，其又被称为抗去垢剂膜（Detergent Resistant Membrane, DRM） ，这也使得DRM中所含蛋白质的功能分析难度较大。

脂筏（Lipid Raft）是由胆固醇（cholesterol）和鞘磷脂（sphingomyelin），GPI锚定蛋白（GPI anchor protein）和棕榈酰化（palmitoylation）蛋白质组成的细胞膜构造，被认为是整合各种功能蛋白的功能域。神经细胞突触和免疫细胞的免疫突触是脂筏的代表性例子。

特点

●操作简单，能快速提取脂筏蛋白

●使用两种类型的缓冲液（A buffer，B buffer）进行两个阶段的提取。先提取出胞浆蛋白和非脂筏蛋白，然后提取脂筏蛋白

●Buffer提取的任何蛋白质都不会失活

●A buffer和一般的RIPA buffer 成分相同^※。B buffer含有表面活性剂，可以通过透析除去

※1％ NP-40 Alternative，0.1％ SDS，50 mMTris-HCl (pH8.0)，150 mMNaCl，0.5％ Sodium Deoxycholate

●适用于哺乳动物细胞/组织

●使用本品配制的溶解液适用于酶活性试验、免疫沉淀（Immunoprecipitation）、蛋白定量（BCA法）、SDS-PAGE和Western blot等

缓冲液套装组成

●A buffer (RIPA buffer) （100 mL）

●B buffer（10 mL）

使用方法

1、用 A buffer溶解组织或培养细胞。

※为了提高溶解效率，推荐使用均质或超声波破碎设备。

2、进行离心分离，使A buffe r中可溶性组分（上层清液）和不溶性组分（沉淀）分离，分别回收。上层清液A buffer 可溶性组分中主要含有胞浆蛋白和非脂筏蛋白。

3、往沉淀的A buffer 不溶性组分中加入B buffer，形成悬浊液。

4、进行离心分离，与步骤2一样分离出可溶性组分（上层清液）和不溶性组分（沉淀），分别回收。上层清液的B buffer 可溶性组分中含有脂筏蛋白。

5、可应用于各种实验。

※A buffer 和 B buffer 不可用于 Bradford 法蛋白质定量。蛋白质定量请使用BCA检测。

※使用本品 A buffer 和 B buffer 进行两个阶段的提取是最适宜的，也有只对细胞使用 B buffer 进行溶解和提取的例子。

各buffer组成

●SDS buffer（2%SDS, 1% Triton X-100, 50 mM HEPES?Na (pH 7.2), 150 mM NaCl）

●UltraRIPA kit A buffer (1％ NP-40 Alternative，0.1％ SDS，50 mM Tris-HCl (pH 8.0)，150 mM NaCl，0.5％ Sodium Deoxycholate)

●UltraRIPA kit B buffer (成分保密)

●1% Triton X-100 (1% Triton X-100, 50 mM HEPES?Na (pH 7.2), 150mM NaCl）    

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