基于焦球菌(PfAgo)的生物传感方法由于其内置的信号放大功能而被广泛探索。然而，PfAgo是一种DNA引导的DNA内切酶的特性使得几乎所有现有的基于PfAgo的报告都可以用于核酸的检测。为了将PfAgo工具箱用于扩展的非核酸检测，华中农业大学食品科学与技术学院Zhengzhang Huang等人系统地研究了PfAgo对引导DNA (gDNA)偏好的机制特征，并提出了一种gDNA去磷酸化调节的PfAgo传感器用于检测非核酸靶点。

研究结果表明，在PfAgo与gDNA浓度的特定比例下，PfAgo对5'-磷酸化的gDNA表现出偏好。利用PfAgo的这种偏好和碱性磷酸酶(ALP)的去磷酸化活性，可以检测到低至2.7 U/L的ALP。此外，将PfAgo与免疫标记的ALP偶联，构建了基于PfAgo的荧光免疫传感器，实现了黄曲霉毒素B1的检测，检测限为29.89 pg/mL，在小麦和玉米样品中具有令人满意的回收率。该方法拓宽了PfAgo工具箱的应用范围，为多种靶标提供了一个简单、灵敏、通用的检测平台。

方案1。图示基于pfago的AFB1检测免疫传感器。(A)探究PfAgo对gDNA 5末端的磷酸化偏好。(B)基于pfago的AFB1免疫传感器检测机制。

图2。导引体去磷酸化调节PfAgo传感器检测ALP。(A)试剂的交叉反应性研究。(B)不同浓度5′-P gDNA的荧光响应。(C)去磷酸化调控PfAgo裂解ALP检测示意图。(D)去磷酸化调制PfAgo传感器检测ALP的标准曲线和(E)线性范围。数据误差条表示平均值±SD (n = 3)。

图3。基于pfago的免疫传感器检测AFB1。(A)基于pfago的AFB1检测免疫传感器示意图。(B) alp标记山羊抗小鼠IgG优化。(C)基于pfago的AFB1检测免疫传感器标准曲线。(D) ELISA法检测AFB1的标准曲线。(E)基于pago的免疫传感器的选择性。数据误差条表示平均值±SD (n = 3)。

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