WB内参抗体选择指南
内参是什么?
内参是一种特异识别高表达或普遍表达蛋白的抗体,在western blot中用于校正蛋白水平。
什么情况下需要用内参抗体?
1. 定量比较:对比不同点样孔间信号的时候,内参是必须的。只有各孔间内参的表达量相同,目标蛋白表达量的变化才是可信的。
2. 上样和转移确认:内参可以确认是否所有的样品都加入及各孔间的转移量是否相等。通过分析内参信号可以确定蛋白从胶转移到膜上是否均一。
3. 研究发表:大部分杂志要求做WB实验时提供内参数据,来确保实验样本中差异表达量是可信的。内参可以校正各孔间目的蛋白的表达量。
在内参抗体的选择过程中一般遵循以下原则:
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K -ATPase等。
2、植物来源实验样本,则可以选择plant actin、Rubisco等。
3、其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。
蛋白分子量
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子45KD,此时不适宜选择β-actin作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。
目的蛋白表达部位
就一般的蛋白检测来说,β-actin、β-Tubulin抗体等就可以了,而针对于核蛋白的定量,特别是样本蛋白就是核蛋白时,选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。
常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3,除此之外,其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等,在一些文献报道中,Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。
而对于膜蛋白检测,常用的内参抗体为Na,K ATPase。
对于线粒体蛋白的检测,常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。
以上几条原则只是针对通常情况,但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的实验环境。
比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。
比如在涉及细胞增殖相关试验中,c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参。
因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献,在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常,应考虑这方面因素。
常见内参:
亚细胞定位 | 内参 | MW(kDa) | 注意事项 |
胞浆/全细胞 | Alpha-tubulin | 55 | 可能不适合关于大年龄差的研究课题[2];Tubulin的表达受抗癌和抗真菌药物的影响。 |
Beta-actin | 43 | 因β-actin是染色质重塑复合体里面的组分,所以不适用于核提取物[1];可能不适合关于大年龄差的研究课题[2]。 | |
GAPDH | 37 | 因组织缺氧会上调GAPDH的表达,所以不适合做与氧有关的研究[3];可能不适合关于大年龄差的研究课题[2]。 | |
Cyclophilin B | 21 | ||
线粒体 | HSP60 | 60 | |
COX IV | 17 | 很多蛋白质的分子量在15-17kDa之间,因此,如果目的蛋白大小和COX 4接近的话就有必要考虑用其他的内参抗体。 | |
细胞核 | Lamin B1 | 66 | 不适合于胚胎干细胞[4]。 |
HDAC | 60 | ||
PCNA | 29 | 不适合作为非增殖细胞的内参。 | |
Histone H3 | 17 | 很多蛋白质的分子量在15-17kDa之间,因此,如果目的蛋白大小和Histone H3接近的话就有必要考虑用其他的内参抗体。 | |
血清 | Transferrin | 77 | Transferrin水平会受某些疾病状态和某些处理如视黄酸的影响。 |
Abmart做为内参抗体最全的,引物最多,物种多应用广,多种分子量选择,全部现货。
M20011H | Actin (2P2) Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Human, Monkey, Mouse, Rat, Dog, Chinese hamster | 1ml |
M20011L | 200μl | ||||
M20011M | 100μl | ||||
M20011S | 50μl | ||||
T40001M | α-Actin Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human | 100μl |
T40001S | 50μl | ||||
T40001XS | 20μl | ||||
P30002M | β-Actin Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Mouse, Rat, Monkey, D melanogaster | 100μl |
P30002S | 50μl | ||||
T40104M | β-Actin Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat, Monkey, Dog, Chicken, Pig, Rabbit | 100μl |
T40104S | 50μl | ||||
T40103M | α-Tubulin Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40103S | 50μl | ||||
M20005H | β-Tubulin (10B1) Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB, IF | Human, Mouse, Rat, Monkey | 1ml |
M20005L | 200μl | ||||
M20005M | 100μl | ||||
M20005S | 50μl | ||||
M30109H | β-Tubulin (2H4) Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Human, Monkey, Mouse, Rat, Dog, Chinese hamster | 1ml |
M30109L | 200μl | ||||
M30109M | 100μl | ||||
M30109S | 50μl | ||||
T40002M | β-Tubulin Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human | 100μl |
T40002S | 50μl | ||||
T40002XS | 20μl | ||||
T40005M | β-Tubulin Antibody (HRP conjugated) |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human | 100μl |
T40005S | 50μl | ||||
T40005XS | 20μl | ||||
M20006H | GAPDH (3B3) Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB, IF | Human | 1ml |
M20006L | 200μl | ||||
M20006M | 100μl | ||||
M20006S | 50μl | ||||
P30008M | GAPDH Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Monkey | 100μl |
P30008S | 50μl | ||||
T40004M | GAPDH Antibody (HRP conjugated) |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40004S | 50μl | ||||
T40004XS | 20μl | ||||
P30266L | Histone H3.1 Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Monkey, Mouse, Dog, Chinese hamster | 200μl |
P30266M | 100μl | ||||
P30266S | 50μl | ||||
P30108L | PCNA Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Monkey, Mouse, Rat, Dog, Chinese hamster | 200μl |
P30108M | 100μl | ||||
P30108S | 50μl | ||||
T40003M | Lamin B1 Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human | 100μl |
T40003S | 50μl | ||||
T40003XS | 20μl | ||||
T40110M | COX IV Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse | 100μl |
T40110S | 50μl | ||||
T40105M | Cyclophilin B Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit | 100μl |
T40105S | 50μl | ||||
T40062M | Cytochrome C Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB, ICC/IF | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40062S | 50μl | ||||
T40107M | HDAC1 Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40107S | 50μl | ||||
T40109M | Na+/K+ - ATPase Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40109S | 50μl | ||||
T40111M | Transferrin Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40111S | 50μl | ||||
T40063M | VDAC1/Porin Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB, IHC | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40063S | 50μl | ||||
T40106M | Vinculin Antibody |
Rabbit Monoclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40106S | 50μl | ||||
T40108M | YY1 Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Mouse, Rat | 100μl |
T40108S | 50μl | ||||
M20009H | Actin (26F7) Antibody for Plants |
Mouse Monoclonal |
WB | Arabidopsis, Oryza sativa, Nicotiana tabacum | 1ml |
M20009L | 200μl | ||||
M20009M | 100μl | ||||
M20009S | 50μl | ||||
P30266L | Histone H3.1 Antibody |
Rabbit Polyclonal |
WB | Human, Monkey, Mouse, Dog, Chinese hamster, Arabidopsis, Soybean | 200μl |
P30266M | 100μl | ||||
P30266S | 50μl | ||||
M51057M | HSP90 protein Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Arabidopsis, Tangerine | 100μl |
M53001M | HSP70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Straw Mushroom | 100μl |
M53003M | HSP70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Lentinus Edodes | 100μl |
M51012M | HSP70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Cherry | 100μl |
M71035L | HSC70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Zebrafish | 200μl |
M71035S | 50μl | ||||
M71009L | Actin (ACTA2) Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Zebrafish | 200μl |
M71009S | 50μl | ||||
M71013L | Actin (ACTB1) Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Zebrafish | 200μl |
M71013S | 50μl | ||||
M71001L | Beta actin 2 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Zebrafish | 200μl |
M71001S | 50μl | ||||
M52008M | HSC70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Plutella Xylostella | 100μl |
M52007M | Actin Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Plutella Xylostella | 100μl |
M52036M | Actin 4 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Silkworm | 100μl |
M52003M | Actin, muscle-type A1 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Silkworm | 100μl |
M53001M | HSP70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Straw Mushroom | 100μl |
M53002M | Hsp70 family ATPase SSC1 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Yeast | 100μl |
M53003M | HSP70 Antibody |
Mouse Monoclonal |
WB | Lentinus Edodes | 100μl |